MÉTODO DE ISOLAMENTO DO DITERPENO PINUSOLIDE EM THUJA OCCIDENTALIS LINN (CUPRESSACEAE)

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 ISOLAMENTO DO DITERPENO PINUSOLIDE EM THUJA OCCIDENTALIS LINN.(CUPRESSACEAE). A presente patente refere-se à descrição das etapas metodológicas necessárias para o isolamento e identificação do diterpeno pinusolide, pertencente à classe dos labdanes. A pinusolide, segundo vários relatos da literatura, atribui-se como principal propriedade a potente e específica ação antagonista do receptor ligante do fator de ativação plaquetária, além da atividade anti-inflamatória e anti-leucêmica. Para efeito de isolamento, a droga vegetal foi extraída durante dois dias com diclorometano e o material vegetal obtido foi novamente re-extraído para esgotamento da droga vegetal. Após, o extrato foi filtrado e exposto à secura. Em seguida, por meio da análise em coluna cromatográfica via úmida filtrante com vários sistemas de solventes orgânicos, obteve-se a fração F3, eluída com hexano/acetato de etila (50:50). A fração obtida foi levada à secura e colocada para fracionamento em coluna de isolamento. O perfil cromatográfico da fração F3 foi visualizado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), sendo esta fração previamente tratada por meio de extração em fase sólida (SPE). Porém, para otimizar o método de isolamento da substância de interesse, foi proposto o sistema isocrático com H~ 2~O e ACN, com fator de separação k=20, contendo o sistema H~ 2~O/ACN (38:62). Apesar da boa resolução de F3, o solvente orgânico foi ainda mais enfraquecido e, utilizando-se o nomógrafo de fase reversa para substituir a ACN por MeOH, mantendo constante a força da fase móvel, chegou-se ao sistema H~ 2~O:MeOH (25:75), que ainda foi enfraquecido, chegando-se a H~ 2~O/MeOH (30:70), que forneceu condições suficientes para isolamento da substância isolada (S1). A substância S1 foi coletada no CLAE e identificada por meio de variadas técnicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN).

 The present patent refers to the description of the methodological steps necessary for the isolation and identification of diterpene pinusolide, belonging to the labdanes class. Pinusolide, according to several reports in the literature, is attributed as its main property to potent and specific antagonistic action of the platelet activating factor binding receptor, in addition to anti-inflammatory and anti-leukemic activity. For the purpose of isolation, the plant drug was extracted for two days with dichloromethane and the obtained plant material was again re-extracted for depletion of the plant drug. The extract was then filtered and exposed to dryness. ; Then, by means of wet filter chromatographic column analysis with various organic solvent systems, the F3 fraction eluted with hexane / ethyl acetate (50:50) was obtained. The obtainedfraction was taken to the dryness and placed for fractionation in isolation column.

 The chromatographic profile of the F3 fraction was visualized by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), and this fraction was previously treated by means of solid phase extraction (SPE). However, to optimize the method of isolation of the substance of interest, the isocratic system was proposed with H2O and ACN, with separation factor k = 20, containing the H 2 O / ACN system (38:62) . ; Despite the good resolution of F3, the organic solvent was further weakened and, using the reverse phase nomograph to replace ACN with MeOH, keeping the force of the mobile phase constant, the H 2 O: MeOH (25:75), which was further weakened, reaching H 2 O / MeOH (30:70), which provided sufficient conditions for isolation of the isolated substance (S 1). The S1 substance was collected in the HPLC and identified by means of several techniques of Nuclear Magnetic Resonance (NMR).

ICS - Instituto de Ciência da Saúde
Farmácia
  • Status:
    Concedida
  • Nº da patente:
    BR 10 2013 004140 8
  • Nível de prontidão tecnológica:
    TRL
  • Autor(es):
    Lariza Darlene Santos Alves, Rosali Maria Ferreira da Silva, Pedro José Rolim Neto, Milton Nascimento da Silva, Camila Bezerra Melo Figueiredo, Pablo de Ataíde Ferreira, Larissa Araújo Rolim, Geyse do Carmo Diniz Sampaio, Caio César de Andrade, Graziella Silvestre
  • Titularidade:
    Universidade Federal do Pará